%0 Journal Article
%T 藏猪IFN-λ3成熟肽基因克隆及原核表达、抗病毒效价测定 Cloning and prokaryotic expression of IFN-λ3 mature peptide from Tibetan pig and determination of antiviral potency
%A 李原野
%A 殷玥
%A 陈瑛琪
%A 张继宗
%A 杨晓宇
%A 王佳煜
%A 朱玲
%A 徐志文
%J 东北农业大学学报
%D 2018
%X 为探究藏猪Ⅲ型干扰素抗病毒作用,以藏猪肠道和肺脏核酸为模板,采用RT-PCR扩增克隆IFN-λ3基因(ZPoIFN-λ3),经测序鉴定后构建原核表达载体pET-32a(+)-mZPoIFN-λ3,并于大肠杆菌BL21(DE3)中表达。通过优化诱导时间、IPTG浓度,利用镍柱亲和层析纯化表达蛋白,并采用SDS-PAGE验证。纯化蛋白经透析复性浓缩,以此为免疫原制备鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体,采用Western Blot鉴定。通过细胞病变抑制法测定表达蛋白在MDBK/VSV系统的抗病毒活性。结果表明,成功克隆藏猪IFN-λ3成熟肽基因,经分析发现藏猪IFN-λ3核酸序列与野猪核酸同源性为100%。成功构建藏猪IFN-λ3原核重组表达质粒,并成功表达大小为34 ku蛋白,蛋白纯化后SDS-PAGE显示为单一条带,Western Blot鉴定结果显示鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体具有良好免疫原性。p ET-32a(+)-mPoIFN-λ3表达蛋白在MDBK/VSV系统抗病毒效价为10×24.5U·0.1 mL-1,比活力为2×103U·mg-1。研究首次克隆藏猪IFN-λ3基因并原核表达,通过研究其抗病毒作用,为进一步研究藏猪IFN-λ3生物学特性和相关基因重组药物生物学功能奠定基础,为临床新药物研发提供新方向。
%K 藏猪
%K IFN-λ3
%K 克隆
%K 原核表达
%K 抗病毒
%U http://dbdn.cbpt.cnki.net/WKD/WebPublication/paperDigest.aspx?paperID=d21e1478-1afa-41b8-9bcf-559fd67e8ecc