%0 Journal Article
%T 二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备 Expression and polyclonal antibody preparation of chitinase gene in Tetranychus urticae Koch
%A 张道伟
%A 陈静
%A 张正玲
%A 曾燕玲
%A 郭玉双
%J 东北农业大学学报
%D 2015
%X 以制备的二斑叶螨c DNA为模板,克隆二斑叶螨几丁质酶Se Chi基因功能结构域催化区片段,大小为786 bp。将该序列片段克隆到表达载体p ET-32a(+)中,获得多克隆原核表达载体p ET-32a-Tu Chi。重组质粒经酶切测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),经0.6 mmol·L-1IPTG诱导4 h后高效表达约45 ku可溶性重组蛋白;经His亲和层析洗脱和浓缩获得高纯度的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备Tu Chi多克隆抗体。制备的多克隆抗体经Western Blot证实能特异性地识别几丁质酶而不与非特异性蛋白结合。ELISA分析表明制备的抗体效价达1??80 000,效价较高,为进一步研究二斑叶螨几丁质酶相关功能奠定基础。
%K 二斑叶螨
%K 几丁质酶
%K 原核表达
%K 多克隆抗体
%U http://dbdn.cbpt.cnki.net/WKD/WebPublication/paperDigest.aspx?paperID=ace1f982-0663-42a2-87e4-9c3ded81b8f3