%0 Journal Article
%T 鲑鱼甲病毒阳性核酸物质制备及RT-PCR检测方法的建立 Positive nucleic acid material preparation and establishment of a RTPCR for salmonid alphavirus
%A 刘敏
%A 杜航
%A 宋傲臣
%A 高帅
%A 唐丽杰
%A 蒋烨
%A 李一经
%J 东北农业大学学报
%D 2016
%X 为建立快速检测鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)RT-PCR方法,根据Gen Bank公布的E2基因序列(1 375 bp)设计引物,扩增S AV E2全长基因,利用假病毒制备技术获得包裹E2核酸物质(RNA)的SAV假病毒溶液。以SAV假病毒作为阳性核酸物质质控品,以E2F:5'CCG-TTG-CGG-CCA-CAC-TGG-ATG 3',E2R:5'CCT-CAT-AGG-TGA-TCG-ACG-GCA-G 3'为引物,优化反应条件,建立SAV的RT-PCR检测方法。结果表明,该方法可扩增SAV E2特异性516 bp的DNA片段,引物最适反应浓度为1.0μmol·L-1,最佳退火温度为57.5℃,对SAV的三种亚型SAV1(V4640)、SAV2(V4619)、SAV5(V4638)检测结果均为阳性,对SVCV、IHNV和IPNV的PCR扩增结果均为阴性;并确定对SAV的核酸最低检出量达1.59 pg;以RT-PCR方法在不同时间对每份样品作3次重复检测,检测结果一致。表明此方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性较好,可用于SAV临床诊断和检测。
%K 鲑鱼甲病毒
%K SAV E2
%K 核酸物质
%K RT-PCR
%K 检测方法
%U http://dbdn.cbpt.cnki.net/WKD/WebPublication/paperDigest.aspx?paperID=3f8d7152-dac8-4d7d-8cbc-b7d0fc5d3f3a