%0 Journal Article
%T 二硫键异构酶DsbC介导重组瑞替普酶在E.coli中可溶表达 Soluble Expression of Recombinant Reteplase in Escherichia coli by Co-Expression of Disulfide Bond Isomerase DsbC
%A 禚孝发
%A 关怡新
%A 姚善泾
%J 高校化学工程学报
%D 2015
%X 瑞替普酶(reteplase)是第三代溶血栓药物,其结构中含有9对二硫键,因而重组瑞替普酶在E.coli中表达时极易形成包涵体。研究引入二硫键异构酶Dsb C介导瑞替普酶折叠过程中错配二硫键的异构,从而促进其在E.coli中的可溶表达。首先分别构建了reteplase、Dsb C表达载体p BAD/His A-R及p ACYCDuet-1-Dsb C,并共转化入E.coli BL21菌株,获得了瑞替普酶的Dsb C共表达体系。在此基础上,考察了发酵过程中诱导方式及时间、培养温度、诱导剂浓度对瑞替普酶可溶表达量的影响。在37℃、200 r·min-1的条件下培养到OD600值为0.6左右时,加入0.1 mmol·L-1的IPTG诱导二硫键异构酶Dsb C的表达;在25℃、160 r·min-1的条件下培养1 h后,加入0.5 g·L-1的L-阿拉伯糖诱导目标蛋白瑞替普酶表达,继续培养10 h收获菌体,结果表明近60%的瑞替普酶实现了可溶表达,其产量约为70 mg·L-1发酵液,用平板溶圈法测得纯化后瑞替普酶的活性为2.35×105 IU·mg-1。通过共表达二硫键异构酶Dsb C实现了瑞替普酶在E.coli中的可溶表达,有助于瑞替普酶的临床及折叠机理研究,对其他富含二硫键的重组蛋白质生产具有一定的指导意义。
%K 瑞替普酶
%K 二硫键异构酶
%K DsbC
%K 共表达
%K 可溶表达
%U http://gxhx.cbpt.cnki.net/WKB2/WebPublication/paperDigest.aspx?paperID=fcba8879-d0cf-4af3-8d1f-6fee2cf8a777