%0 Journal Article
%T 葡萄原生质体分离及瞬时转化体系的建立
%A 舒小娟
%A 温腾建
%A 邢佳毅
%A 卢
%A 龙
%A 胡建芳
%J 西北植物学报
%D 2015
%X 为了建立葡萄原生质体进行遗传转化的技术,该研究以葡萄品种‘黑香蕉’ 的叶片和愈伤组织为材料,分析纤维素酶和离析酶的浓度与配比、渗透压和酶解时间等主要因素对葡萄原生质体分离的影响,探讨建立稳定、高效的葡萄原生质体分离与瞬时转化体系,为鉴定目标基因的功能奠定基础。结果表明:(1)葡萄叶片原生质体的分离以3.0%纤维素酶和0.75%离析酶的酶组合,在0.6 mol/L甘露醇溶液中,酶解14 h为宜,每克游离产量为4.09×106个原生质体,活力为83.12%。(2)葡萄愈伤组织原生质体的分离以2.0%纤维素酶和0.5%离析酶的酶组合,在0.5 mol/L甘露醇溶液中,酶解14 h为宜,每克游离产量为6.05×106个原生质体,活力为84.13%。(3)利用该方法得到的葡萄原生质体为受体,采用40% PEG-4000介导转化质粒载体pEZS-NL,目标基因瞬时表达产物检测表明,GFP蛋白表达稳定、清晰。该研究建立的葡萄原生质体制备和转化体系,可以用较少量的质粒DNA获得外源基因在原生质体内的表达,为葡萄功能基因的研究提供技术支持。
%K 葡萄
%K 原生质体
%K 叶片
%K 愈伤组织
%K 遗传转化
%K 瞬时表达
%U http://xbzwxb.cnjournals.com/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20150627&flag=1