%0 Journal Article
%T 靶向抗肿瘤蛋白irgd-cdd的原核表达及生物活性鉴定
%A 王启帆
%A 薛莹
%A 冯新为
%A 张革
%J 中国生物工程杂志
%D 2014
%X 目的:原核表达并纯化具有特异性成纤维细胞激活蛋白(fapα)酶切位点的靶向抗肿瘤gp-cdd-irgd融合蛋白,利用fapα的酶切功能切除融合标签,检测其对fapα阳性肿瘤细胞株的毒性。方法:设计并合成gp-cdd-irgd基因,插入pgex-4t3载体,构建重组表达质粒,转化至bl21大肠杆菌感受态细胞中,iptg诱导表达,sds-page分析重组融合蛋白的表达,westernblot检测融合蛋白的表达,经gst亲和柱纯化融合蛋白后,通过体外细胞毒性试验(mtt法)和细胞凋亡实验评价该融合蛋白的靶向抗肿瘤活性。结果:成功构建重组原核表达质粒pgex-gp-cdd-irgd,可溶性表达相对分子量约为36kda的融合蛋白gst-gp-cdd-irgd,纯化后蛋白纯度约为90%,经mtt实验测定其对fapα阳性4t1细胞株的ed50约为18.5μmol/l,流式细胞术检测到其对fapα阳性4t1细胞株具有选择性毒性作用,早期凋亡比例达到约28%。结论:原核表达的重组融合蛋白gp-cdd-irgd对fapα阴性4t1细胞株未显示毒性,而对fapα阳性4t1细胞株具有显著的促凋亡作用,为进一步研究其在体内的靶向抗肿瘤活性提供了依据。
%K 靶向抗肿瘤
%K 融合蛋白
%K 促凋亡
%K 酶切效力
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract16469.shtml