%0 Journal Article
%T 改进重叠延伸pcr技术构建定点双突变
%A 徐书景
%A 张跃灵
%A 张妍
%A 赵宝华
%A 鞠建松
%A 马延和
%J 中国生物工程杂志
%D 2010
%X 目的:目的dna片段中快速构建位点不同的定点双突变体。方法:借鉴dnashuffling技术中dna小片段延伸扩增获得全长dna片段的工作原理,与常规基因定点突变技术相结合,改进重叠延伸pcr技术构建定点双突变。结果:对嗜酸热脂肪杆菌(alicyclobacillusacidocaldarius)tc-12-31的甘露聚糖酶基因aamana中两个可能的活性位点e151和e231进行双点突变,先后经过无引物和有引物两步pcr,扩增获得全长dna,测序结果表明得到预期的定点双突变体;酶活性检测和薄层层析结果表明双点突变体丧失了酶的活性。结论:改良的重叠pcr技术,能经济、简便、高效地获得双点定点突变体,在酶的催化机理的阐述、蛋白质结构改造等分子生物学领域中具有较高的应用价值。
%K 重叠延伸pcr
%K 定点双突变
%K 甘露聚糖酶
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract12512.shtml