%0 Journal Article
%T hk1-l-fc融合蛋白在cho细胞中的表达及其活性研究
%A 邓春平
%A 陶建军
%A 侯永敏
%A 钟翎
%J 中国生物工程杂志
%D 2011
%X 为进一步改造重组人激肽释放酶1(hk1),以期提高其生物活性,制备了通过柔性接头相连接的重组人激肽释放酶1-l-igg1fc融合蛋白(hk1-l-fc)。采用重叠延伸pcr技术构建hk1-l-fc融合基因,克隆至表达载体pcdna3.1,在中国仓鼠卵巢细胞(cho-s)中表达。利用proteina亲和层析柱纯化融合蛋白,sds-page、westernblotting、飞行时间质谱(maldi-tof-ms)、hplc检测表达产物,底物法检测融合蛋白的体外活性。结果显示:成功构建pcdna3.1-hk1-l-fc重组表达载体;获得稳定表达融合蛋白的细胞株;无血清悬浮批式培养的表达量在0.7mg/l以上;纯化的蛋白其纯度在95%以上,分子量约60kda;活性检测显示其比活性在9.2u/mg以上,较hk1-fc蛋白提高了18%以上。
%K 激肽释放酶1
%K 融合蛋白
%K cho细胞
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract15398.shtml