%0 Journal Article
%T 抗egfrviii噬菌体抗体库的构建和筛选
%A 周敏
%A 石必枝
%A 顾健人
%A 李宗海**
%J 中国生物工程杂志
%D 2010
%X 目的：应用噬菌体展示技术筛选针对表皮生长因子受体突变体ш(epidermalgrowthfactorreceptorvarianttypeⅲ,egfrviii)的单链抗体(singlechainfv,scfv)。方法：利用原核表达纯化的人egfrviiiex蛋白和高表达egfrviiiex的小鼠成纤维细胞系nih3t3免疫小鼠，扩增vh和vl片段并拼装成scfv基因，连接至噬菌粒pcantab5e，电击转化hpd3cells，构建噬菌体单链抗体库，并进行3轮富集筛选。在第4轮筛选时，采用了降低抗原浓度的方法。然后将筛选得到的阳性克隆测序分析，转化e.colihb2151，iptg诱导可溶性scfv的表达。结果：构建了库容为7.9×107的噬菌体单链抗体库。经过第4轮低浓度抗原筛选，得到了较高亲和力的克隆。取单个阳性克隆测序分析结果表明，该抗egfrviiiscfv基因序列长807bp，编码268个氨基酸。iptg诱导后表达的可溶性scfv可分别与纯化的egfrviiiex抗原以及细胞表面的egfrviiiex结合。结论：利用噬菌体抗体库筛选得到了高亲和力的抗egfrviiiscfv，为开发针对egfrviii的抗体药物提供了靶向载体分子。
%K 表皮生长因子受体突变体ш
%K 噬菌体抗体库
%K 单链抗体
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract12286.shtml