%0 Journal Article
%T 利用red同源重组技术构建产l-苏氨酸的基因工程菌
%A 闫继爱
%A 张雪
%A 张芸
%A 左佃光
%A 陈宁
%A 温廷益**
%J 中国生物工程杂志
%D 2010
%X 利用red重组技术构建不同基因突变的l-苏氨酸工程菌大肠杆菌ithr，研究单敲除meta、ilva和双敲除meta、ilva基因后对l-苏氨酸积累的影响。应用质粒pkd46介导的red同源重组系统，通过第一次同源重组将拟敲除基因替换为氯霉素抗性基因，再通过重组酶在frt位点发生第二次同源重组，消除抗性基因，成功敲除了菌株ithr体内苏氨酸合成的代谢旁路途径中的meta和ilva基因，构建了三株不同的基因突变株。将携带苏氨酸操纵子的工程质粒pwye065电转化入敲除不同基因的突变株中，构建基因工程菌。经5l发酵罐发酵产酸实验，未敲除任何基因的菌株ithr/pwye065l-苏氨酸的产量为5.55±0.51g/l，meta基因单敲除菌株ithr△meta/pwye065l-苏氨酸产量为9.77±1.83g/l，ilva基因单敲除菌株ithr△ilva/pwye065l-苏氨酸产量为8.65±1.42g/l，同时敲除ilva和meta基因的菌株ithr△meta△ilva/pwye065l-苏氨酸的产量增加到13.6±1.14g/l。通过敲除l-苏氨酸的旁路代谢途径中的关键酶的基因，可以增强l苏氨酸积累的效果，为l-苏氨酸工程菌的进一步改造奠定了基础。
%K 大肠杆菌
%K red同源重组
%K 基因敲除
%K l-苏氨酸
%K 发酵
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract12259.shtml