%0 Journal Article
%T 内皮素1的克隆表达及其诱发抗体的初步研究
%A 闫爱丽
%A 王多宁
%A 张润歧
%A 和新盈
%A 周伊
%A 聂蕾
%A 楮薇薇
%J 中国生物工程杂志
%D 2008
%X 目的：克隆内皮素1（endothelin1,et1）基因、表达et1融合蛋白，以期诱导机体产生et1抗体，中和患者体内过量的et1。方法：根据人et1的多肽序列合成et1基因，将其插入到pthiohisa的ecori和sali位点，重组质粒pthiohisa-et1进行酶切鉴定及序列测定验证后转化top10，iptg诱导的重组菌经sds-page检测融合蛋白thioredoxin-et1的表达量；表达的融合蛋白用probond亲合层析纯化并经hplc鉴测其纯度；每只小鼠按25、50、100ug/次剂量的thioredoxin-et1每两周免疫一次，共4次，最后一次免疫10d后制备抗血清，经westernblot和elisa检测证明thioredoxin-et1融合蛋白具有et1免疫反应原性。结果：经过质粒酶切鉴定及序列分析表明，构建了正确的融合表达载体pthiohisa-et1，用1mmoliptg诱导工程菌，融合蛋白thioredoxin-et1的表达量占菌体总蛋白的50%，多以包涵体的形式存在，包涵体经洗涤，变性和复性后，用probond亲合层析纯化得到了thioredoxin-et1融合蛋白，经hplc鉴测其纯度为90%。制备的抗血清中et1抗体的效价可达104。结论：应用thioredoxin-et1融合蛋白可以诱发机体产生et1抗体，为研究et1在患者体内的过量表达及对患者的免疫治疗开辟了新的途径。
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract11068.shtml