%0 Journal Article %T 一种酿酒酵母附加型分泌表达载体pyes2/ct/α-factor的构建及鉴定 %A 胡亚冬 %A 姚冬生** %J 中国生物工程杂志 %D 2009 %X 以ppic9为模板,通过pcr扩增获得酿酒酵母的α-交配因子(α-factor),并克隆至酿酒酵母胞内表达载体pyes2/ct中,构建了一种新型酿酒酵母附加型分泌表达载体pyes2/ct/α-factor(pycα)。再将甘露聚糖酶基因(mannase,man)通过酶切、连接克隆至pycα的α-factor的下游,构建了pycα-man重组载体检验pycα的分泌性能和稳定性。结果显示α-factor可引导甘露聚糖酶基因在胞外分泌表达,在曲利本兰培养基上形成明显的水解圈,进一步分析重组菌胞外和胞内酶活,结果显示对照invsc1/pycα的两种酶活都未检测到,而invsc1/pycα-man具有明显的胞外酶活,未检测到胞内酶活,说明构建的pycα具有良好的分泌性能;稳定性实验表明重组质粒连续培养150h仍具有良好的稳定性。 %K 酿酒酵母 %K 信号肽 %K 分泌表达 %U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract12206.shtml