%0 Journal Article
%T 前手性酮全细胞转化体系中甲酸脱氢酶c-端无序结构与转化效率的关系研究
%A 李炳娟
%A 李玉霞
%A 李北平
%A 凌焱
%A 周围
%A 刘刚
%A 张景海
%A 岳俊杰
%A 陈惠鹏
%J 中国生物工程杂志
%D 2013
%X 目的:构建前手性酮类化合物的重组全细胞催化体系,并研究cbfdhc-端无序的11个氨基酸与酶活性的关系。方法:利用基因工程方法构建野生型lbadh,cbfdh及c-端11个氨基酸缺失的cbfdh截短突变体的表达菌株;sds-page分析其表达方式及表达量,利用分光光度计法测定全菌破碎上清中的酶活性;将含野生型lbadh及cbfdhδ354-364的菌株与底物混合孵育,考察双菌全细胞体系的催化效果;并将含野生型cbfdh及cbfdhδ的菌液分别与含野生型lbadh的菌株混合催化苯乙酮的转化,比较两种菌的协助转化效率。结果:构建了重组表达载体petduet-1-adh,petduet-1-fdh及petduet-1-fdhδ354-364,并实现了在大肠杆菌中的异源表达,含野生型lbadh及cbfdh的两种菌株能够实现苯乙酮的协同转化,转化率为24.4%,产物对映体纯度为96.79%;cbfdh及cbfdhδ354-364分别占上清总蛋白的28.54%及37.72%,c-端的缺失未影响cbfdh的可溶性表达,但cbfdhδ354-364全菌上清催化nad+转化为还原型nadh的效率降低,为cbfdh粗酶液的29.82%;且重组菌株rossetta(de3)-petduet-1-fdhδ354-364与rossetta(de3)-petduet-1-adh协同转化苯乙酮的转化率降低至8%。结论:重组菌株rossetta(de3)-petduet-1-adh与rossetta(de3)-petduet-1-fdh能够协同催化苯乙酮转化,转化效率为24.4%,产物对映体纯度为96.79%;重组菌株rossetta(de3)-petduet-1-fdhδ354-364与rossetta(de3)-petduet-1-adh协同转化苯乙酮的效率为rossetta(de3)-petduet-1-fdh与rossetta(de3)-petduet-1-adh协同转化效率的32.79%,且rossetta(de3)-petduet-1-fdhδ354-364全菌上清催化还原型辅酶再生的效率降低,提示c-端无序的11个氨基酸残基对cbfdh酶活性的发挥起着重要的作用。
%K 博伊丁假丝酵母
%K 甲酸脱氢酶
%K 辅酶再生
%K 全细胞催化
%K 结构改造
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract16118.shtml