%0 Journal Article
%T shrna随机文库结合tk自杀基因筛选靶向hiv-1ltr相关宿主因子
%A 李建彬
%A 米志强
%A 安小平
%A 谭莉
%A 陈斌
%A 王晓娜
%A 范华昊
%A 张文慧
%A 张博
%A 方祥
%A 童贻刚
%J 中国生物工程杂志
%D 2012
%X 构建shrna随机文库与hiv-1ltr启动胸苷激酶基因(tk基因)稳定表达的稳定细胞系hek293/tk,将两者结合起来,筛选靶向hiv-1ltr相关宿主因子。方法:通过化学合成含有19个随机脱氧核苷酸的发夹结构,将其退火补平后与合成的接头linker连接进行pcr反应,将pcr产物酶切后置于慢病毒载体plenti-u6启动子下游由此构建shrna随机文库;利用重叠pcr将hiv-1ltr片段和tk基因连接起来,连接产物经酶切后与pcdna3.1载体连接;将连接正确的质粒转染hek293细胞同时用g418加压筛选获得稳定细胞系hek293/tk;将所获得的文库质粒包装成慢病毒后侵染所构建的hek293/tk细胞系,通过加入药物gcv进行加压筛选获得存活细胞。结果:成功筛选到加药后存活下来的细胞,抽提细胞基因组,采用巢式pcr扩增目的干扰序列并用westernblot对干扰序列进行验证,鉴定获得一个克隆所表达的shrna能对tk基因的表达起到抑制作用,通过测序分析获得其干扰序列,该序列很有可能针对hiv-1ltr某宿主相关因子。结论:成功构建了一种筛选hiv-1ltr相关宿主因子的方法,筛选所得序列可以定位到具体相关宿主因子,为靶向筛选抗hiv-1药物提供了重要手段。
%K 慢病毒载体
%K shrna随机文库
%K 人类免疫缺陷病毒(hiv-1)
%K 末端重复序列(ltr)
%K tk自杀基因
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract15872.shtml