%0 Journal Article
%T dek蛋白的真核表达纯化及其活性检测
%A 郭海红
%A 杨辛
%A 郭芳
%A 胡红刚
%J 中国生物工程杂志
%D 2011
%X 利用bac-to-bac杆状病毒表达系统表达dek蛋白并进行纯化。首先以pfastbaci质粒构建重组质粒pfastbaci-dek,转化dh10bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体bacmid-dek,通过脂质体介导转染sf9细胞产生具有强感染力的重组杆状病毒acnpv-dek。用此重组杆状病毒acnpv-dek感染sf9细胞表达his-dek融合蛋白。在非变性条件下,利用ni-ntaagarose对表达的his-dek融合蛋白进行纯化,经sds-page和westernblotting分析,在50kda处出现特异性蛋白条带并证实其为his-dek融合蛋白。凝胶迁移阻滞实验表明,融合蛋白his-dek与dna的结合具有结构特异性,其与超螺旋型dna结合活性强于与线性化dna的结合活性。真核表达并纯化的融合蛋白his-dek与dna的结合活性要明显强于原核表达的融合蛋白his-cdb。dek蛋白的磷酸化修饰会阻碍其与dna的结合,而sf9细胞中表达的融合蛋白his-dek存在磷酸化修饰,将his-dek去磷酸化后,其与dna的结合活性有所提高。
%K dek蛋白
%K 杆状病毒表达系统
%K 凝胶迁移阻滞
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract15660.shtml