%0 Journal Article
%T 一种新型的通过免疫富集纯化溶酶体方法
%A 张磊
%A 阳宇
%A 吴传芳
%J 中国生物工程杂志
%D 2013
%X 用传统的密度浓度梯度法分离溶酶体具有耗时长，样品需求量大，而且无法得到纯度较高的溶酶体等不足，因此有必要开发一种简便分离溶酶体的方法。依据溶酶体膜蛋白lamp2的特性，开创性地尝试用免疫富集溶酶体膜蛋白的方式纯化溶酶体：首先构建了带flag标签的lamp2真核表达载体，并转染hela细胞，用免疫荧光鉴定其亚细胞定位情况，发现重组蛋白lamp2-flag特异性定位于溶酶体。在hela细胞中筛选得到了稳定表达lamp2-flag的细胞系。大规模培养该细胞系，在非变性条件下分离细胞质提取物，利用anti-flag抗体做免疫沉淀，用蛋白质免疫印迹检测，发现沉淀产物中特异性富集了溶酶体标识蛋白lamp1。用糖苷酶活性检测，发现沉淀产物中酸化蛋白酶活性很高，表明富集到较纯的溶酶体。这种改良的新型方法步骤简捷，样品需求量少，获得的溶酶体纯度高，为从少量细胞中分离溶酶体提供了一个种优化方案。
%K 分子生物学
%K 细胞器分离
%K 免疫共沉淀
%K 溶酶体
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract16183.shtml