%0 Journal Article
%T 重组半胱氨酸脱巯基酶atlcd的表达、纯化及酶学性质
%A 袁慧虹
%A 梁雅丽
%A 沈洁洁
%A 张丽萍
%A 刘志强
%A 裴雁曦
%J 中国生物工程杂志
%D 2013
%X 目的：在重组大肠杆菌中表达重组拟南芥l-半胱氨酸脱巯基酶atlcd（h2s内源产生关键酶），确定最佳诱导表达和纯化条件，并研究重组酶的酶学性质。方法：对大肠杆菌bl21（de3）/pet28a-lcd进行异丙基-β-d-硫代半乳糖苷（iptg）诱导培养，将纯化的目的蛋白atlcd进行酶学性质的研究。结果：重组蛋白的最佳诱导表达条件为0.1mmol/liptg，30℃诱导3h。500mmol/l的咪唑洗脱ni柱可得较纯的目的蛋白。重组酶性质研究结果表明，酶的最适ph为9.5，最适作用温度为37℃，最适条件下的以l-cys为底物的米氏常数（km）为1.572mmol/l，vmax为1.52nmol/mg·min。金属离子mg2+，fe3+和edta对重组酶的活性有一定的抑制作用，ba2+、ca2+和co2+在一定程度上提高了酶的活性，其中co2+效果更强。蛋白变性剂sds和酶抑制剂羟胺也不同程度地抑制了酶的活性。结论：明确了重组atlcd的酶学性质和最佳诱导表达及纯化条件，为该lcd的深入研究和气体信号分子h2s在植物应答逆境胁迫机制的研究奠定了基础。
%K 硫化氢
%K atlcd
%K 酶学性质
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract16176.shtml