%0 Journal Article
%T 地衣芽孢杆菌谷氨酰内切酶的克隆表达与性质研究
%A 朱蓓霖
%A 周杰
%A 汪正华
%A 赵云
%A 黄静
%A 吴自荣
%J 中国生物工程杂志
%D 2013
%X 谷氨酰内切酶在食品行业应用广,但来源受限。以地衣芽孢杆菌atccl4580基因组dna为模板,pcr扩增出670bp大小的谷氨酰内切酶基因,克隆入表达载体pet28a(+),转化escherichiacolibl21(de3),经iptg诱导,重组蛋白主要以包涵体形式存在。通过与硫氧还蛋白融合、降低诱导温度和共表达分子伴侣三种策略,以期增加重组蛋白可溶性,结果表明分子伴侣对可溶性有明显提高作用,而低温和硫氧还蛋白影响甚微。将重组蛋白样品与底物(z-phe-leu-glu-pna)进行孵育反应,结果表明,该酶可有效水解谷氨酸残基的羧基,释放出4-硝基苯胺。酶学性质研究表明,此酶的最适反应温度为42℃,最适作用ph为8.0,金属离子mn2+对酶活有较好的激活作用。
%K 地衣芽孢杆菌
%K 谷氨酰内切酶
%K 基因克隆
%K 性质研究
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract16025.shtml