%0 Journal Article
%T 幽门螺杆菌baba蛋白n段的基因克隆、表达纯化及体外粘附活性评价
%A 高涵
%A 薛利军
%A 刘小北
%A 冒晓蓓
%A 任丽丽
%A 耿建
%A 戴婷婷
%A 于锋
%A 褚晓源
%J 中国生物工程杂志
%D 2013
%X 目的:克隆幽门螺杆菌baba蛋白的n段(氨基酸1-437位)基因(baba1),构建其原核表达质粒,表达并纯化获得携带6×his标签的baba1融合蛋白,评价融合蛋白的体外粘附活性。方法:以幽门螺杆菌j99菌株基因组dna为模板,通过pcr扩增获得baba1基因片段,并定向克隆至原核表达载体pet-32a(+)。经酶切及测序分析正确后,将重组质粒pet32a-baba1转化大肠杆菌bl21(de3)菌株,进行iptg诱导表达,并对表达产物进行镍柱纯化、sds-page和westernblot鉴定。采用菌落计数法评价baba1融合蛋白在体外的细胞粘附活性。结果:成功扩增了baba1基因,构建了pet32a-baba1原核表达质粒,并通过优化该表达系统的最适诱导和纯化条件,获得了具有活性的6×his-baba1融合蛋白,后者能显著增强大肠杆菌bl21(de3)在体外对胃癌mfc细胞的粘附。结论:成功诱导表达并纯化获得了有粘附活性的6×his-baba1融合蛋白,为进一步研究其免疫活性和生物学功能奠定了基础。
%K 幽门螺杆菌
%K baba1
%K 原核表达
%K 蛋白纯化
%K 粘附
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract16014.shtml