%0 Journal Article
%T s-2-氯丙酸脱卤酶的定向进化及其应用
%A 刘鹏
%A 林春娇
%A 杨立荣
%A 徐刚
%A 吴坚平
%J 中国生物工程杂志
%D 2012
%X 为提高s-2-氯丙酸脱卤酶的活力,通过易错pcr的方法将源于假单胞菌(pseudomonassp.cgmcc3267)的脱卤酶(dehii)进行定向进化,进化酶dehii-b2的比活提高3.9倍。同源模建两者的三维结构,并与底物进行分子对接。结果表明,突变位点为a7i,进化酶dehii-b2的结合能比原始酶降低了1.4kcal/mol,活性中心asp10与底物α碳原子的距离缩短了0.3216nm,因而加快了酶反应速率、提高了酶比活。目前,该酶的比活高于实验室已得酶。与原始酶相比,其最适温度和热稳定性略有增加,最适ph和ph稳定性没有明显变化。对该酶的应用做了初步的探索,结果表明在40℃,60mmol/l底物浓度下反应10h,转化率达到49.6%,ees>99.9%,因此该酶有一定的应用价值。
%K 2-氯丙酸
%K 脱卤酶
%K 定向进化
%K 分子对接
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract15773.shtml