%0 Journal Article
%T rhil-12二硫键、n-糖基化位点及c端氨基酸序列分析
%A 赵峰
%A 张宜俊
%A 冉艳红
%A 王兴勇
%A 叶倩君
%A 李弘剑
%J 中国生物工程杂志
%D 2014
%X 重组人白细胞介素12（rhil-12）是一种已经用于治疗肿瘤，寄生虫、病毒性感染及造血障碍等疾病研究的异二聚体糖蛋白。结构确证是质量控制的重要内容，此研究对cho细胞表达的rhil-12二硫键配对方式、n-糖基化位点以及c端氨基酸序列进行了分析，使用trypsin、chymotrypsin和glu-c三种酶分别对rhil-12进行非还原酶解，尽可能地在其所有半胱氨酸残基之间断裂而形成二硫键相连的肽段，然后使用lc-ms/ms对酶解后的肽段样品进行分析，确定了rhil-12样品中存在和理论配对方式相符的7对二硫键。将rhil-12二硫键还原后并烷基化修饰保护，分别采用trypsin，chymotrypsin和gluc进行酶解，并用lc-ms/ms对酶解后肽段进行了质谱肽图及c端氨基酸序列分析，确定了rhil-12p35亚基c端氨基酸序列的8个氨基酸、p40亚基c端氨基酸序列的15个氨基酸。对rhil-12样品还原及烷基化后用trypsin变性酶解，所得肽段在h2o及h218o水中分别用pngasef糖苷酶处理酶切产物。并通过二级质谱分析脱糖后糖肽段分子量变化，从而确定了rhil-12的3个n糖基化修饰位点，分别为p35亚基的71位和85位以及p40亚基的200位。通过建立酶解结合二级质谱鉴定的方法，证明了新药rhil-12的二硫键位点、c端氨基酸序列和糖基化位点与理论一致。
%K rhil-12
%K 二硫键
%K n-糖基化位点
%K c端氨基酸序列
%K lc-ms/ms
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract16298.shtml