%0 Journal Article
%T 反义p73基因诱导人肝癌细胞hepg2的凋亡
%A 靳雪源*
%A 赵平
%A 王雅青
%A 兰云
%A 丁宁
%J 中国生物工程杂志
%D 2010
%X 目的：构建表达重组反义p73基因的重组逆转录病毒，观察其对人肝癌细胞hepg2的凋亡诱导活性，并进一步探讨其作用机制。方法：克隆p73基因的反义片段，重组法构成逆转录病毒载体pbabe-p73（pbp73），以脂质体lipofectamine2000将其转染293a细胞进行病毒包装；将逆转录病毒感染人肝癌细胞hepg2，用mtt法检测细胞生长抑制情况，westernblotting检测p73的表达；再分别用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡；最后检测p53，caspase-3和bcl-2蛋白的表达变化。结果？重组质粒pbp73经鉴定连接正确，其转染293a细胞后上清液中可得到病毒，滴度达5×107pfu；mtt检测见pbp73病毒组48和72h细胞抑制率高于对照组（45.1%vs.5.3%，69.5%vs.17.3%，均p<0.05）。琼脂糖凝胶电泳出现典型梯形条带；流式细胞仪检测出现凋亡峰，于转染48h后达最高峰，其凋亡百分率高达20.47%；p73蛋白高表达组p53和caspase-3蛋白的表达亦有显著升高（p<0.05），但bcl-2蛋白未见表达差异。结论：成功构建了p73逆转录病毒，反义p73基因在体外能够有效地诱导人肝癌细胞hepg2的凋亡，其可能机制是通过激活caspase-3而发生作用。
%K 反义p73基因
%K 逆转录病毒
%K 肝癌细胞
%K 凋亡
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract12213.shtml