%0 Journal Article
%T 以neprilysin蛋白酶为靶标的药物筛选模型的建立及应用
%A 田聪会
%A 唐延婷
%A 王权
%A 周红刚
%J 中国生物工程杂志
%D 2015
%X 目的:建立以蛋白酶neprilysin(nep)为靶点的高通量药物筛选模型,应用该模型筛选抑制剂。方法:利用毕赤酵母表达系统。构建重组质粒ppiczα-a-nep,表达载体通过与酵母菌x-33基因组染色体发生同源重组,将外源基因整合于染色体后实现目的蛋白的表达。应用荧光共振能量转移法(fret)检测蛋白酶活性,优化反应条件,建立药物筛选体系,筛选抑制剂。结果:成功构建表达载体ppiczα-a-nep;建立了以nep为靶标的药物筛选模型,获得模型反应动力学参数vmax=3.6μm/s,kcat/km=4.5×105m-1s-1,测定模型z-因子为0.89,说明体系稳定可用于以nep为靶标的药物的高通量筛选;并用该模型对天然产物组分库进行筛选,在0.5mg/ml的药物浓度下,得到抑制率较高的药物为4种,并测得半数抑制浓度ic50值,其中mdcncl01000242的ic50值最低,为(8.31±0.03)μg/ml。结论:建立的药物筛选模型较为理想,适用于nep抑制剂的筛选,可促进药物的研发。
%K nep
%K 毕赤酵母表达
%K 抑制剂
%K 高通量筛选
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract16511.shtml