%0 Journal Article
%T 针对人tudor-sn蛋白t103位点的应激磷酸化抗体制备及分析
%A 高星杰
%A 张毅
%A 苏超
%A 付雪
%A 史雪彬
%A 尹洁
%A 何津岩
%A 王鑫廷
%A 姚智
%A 杨洁
%J 中国生物工程杂志
%D 2014
%X 目的：针对人tudor-sn蛋白t103位点（103位苏氨酸，thr103）制备兔源多克隆磷酸化抗体，并进行应激磷酸化的时相分析。方法：首先人工合成含磷酸化t103（pt103）位点的多肽，4次免疫新西兰大白兔后获取抗血清；然后以akta蛋白纯化系统进行纯化，并利用westernblotting和细胞免疫荧光实验对纯化后的抗pt103抗体进行鉴定；最后以in-cellwestern法进行tudor-sn蛋白的应激磷酸化/去磷酸化时相性分析。结果：（1）确定并合成磷酸化多肽“tienkptpqgrc”，收集约75ml兔源抗血清，纯化后获取2.08mg/ml抗pt103抗体；（2）当hela细胞受到氧化应激时，以pt103抗体检测的磷酸化信号增强，可在胞浆中检测到颗粒状信号，与内源性tudor-sn应激颗粒存在共定位关系；（3）在氧化应激及应激去除后恢复过程中，t103位点的磷酸化水平呈现一定的波动性时相。结论：成功制备针对tudor-sn蛋白t103位点的兔源多克隆抗pt103抗体，有助于从磷酸化修饰角度进行tudor-sn在细胞应激方面的机制探讨。
%K tudor-sn
%K 磷酸化
%K 抗体
%K 应激颗粒
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract16355.shtml