%0 Journal Article
%T 奶牛α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定
%A 李学仁
%A 曹瑞兵
%A 李斐
%A 魏建超
%A 陈溥言
%J 中国生物工程杂志
%D 2005
%X 提取经新城疫病毒诱导培养的奶牛外周血淋巴细胞总rna,应用rt-pcr方法扩增出奶牛α干扰素成熟蛋白基因,然后将特异性片段连接到pmd18-t载体,测序结果表明,扩增片段为牛α干扰素成熟蛋白序列,与genebank上发表的α1干扰素序列同源性为98%。然后将特异性片段连接到含分泌信号肽序列的pichiapastoris表达载体ppiczαa上,将重组质粒经saci酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株x-33。转化子经pcr分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了boifn-α在毕赤酵母系统中的分泌表达。sds-page结果显示表达产物分子量约为23kda,比其推导结果(20kda)略大,推测可能是因为表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制法结果表明,重组牛ifn-α具有较高的干扰素活性,约为4.1×105u/ml,经微量蛋白测量仪测得,其表达量约为80μg/ml,比活为5.1×106u/mg。
%K 奶牛α干扰素
%K 毕赤酵母
%K 分泌表达
%K 抗病毒活性
%U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract15260.shtml