%0 Journal Article
%T hela细胞中zwint-1选择剪接亚型v7的表达鉴定
%A 苏景华
%A 李蕊
%A 刘俊
%A 周艳琳
%A 陈小璇
%A 代剑平
%A 王革非
%A 李康生
%J 癌变·畸变·突变
%D 2014
%X ？目的：验证在hela细胞系中是否存在zwint-1v7选择性剪切亚型的mrna和蛋白产物。方法：在缺失片段两侧设计引物，利用pcr和克隆测序验证hela细胞中是否存在缺失片段的mrna；构建zwint-1v73′端特异区段(z7)的gst融合表达载体pgex-kg-gst-z7，转化入bl21菌种诱导表达，菌体经超声破碎和2mol/l尿素洗涤纯化，融合蛋白经sds-page电泳并切胶回收后作为抗原与佐剂混合乳化并免疫c57bl/6小鼠，收获多克隆抗血清anti-z7，采用dotblot检测多克隆抗体的效价，westernblot检测hela细胞全蛋白中的z7蛋白产物。结果：pcr和测序结果表明存在缺失37bp的核酸片段；sds-page电泳显示在30.7kda处出现明显的蛋白条带；dotblot结果表明1∶5000稀释的多克隆抗体能检出12nggst-z7；westernblot结果表明，1∶200稀释的多克隆抗体可识别hela细胞中zwint-1v7蛋白。结论：本研究在核酸水平和蛋白水平初步验证了hela细胞中存在zwint-1v7。
%K hela细胞
%K zwint-1v7蛋白
%K 原核表达
%K 多克隆抗体制备
%U http://www.egh.net.cn/CN/abstract/abstract3388.shtml