%0 Journal Article
%T 二甲基酚橙法测定尿酸酶活性和识别尿酸酶高活性突变体
%A 刘苗苗
%A 冯娟
%A 刘红博
%A 杨晓兰
%A 冯丽萍
%A 李元丽
%A 廖飞
%J 应用与环境生物学报
%P 523-527
%D 2013
%R 10.3724/SP.J.1145.2013.00523
%X 考察了采用二甲基酚橙测定过氧化氢（xylenol-orange-assay-of-hydrogen-peroxide，xoahp）法测定尿酸酶活性的可靠性以及识别高活性尿酸酶突变体的方法.将苛求芽孢杆菌（bacillusfastidious）尿酸酶4种突变体成对组合，使其催化效力比值在1.3-4.1间变化；将每种突变体表达载体转化大肠杆菌，取30个克隆分别转移到1.0ml液体培养基放大，18℃诱导表达16h，收集细胞后超声裂解得裂解液.在ph8.9的tris-hcl缓冲液中0.33mmol/l以下尿酸对xoahp法测定尿酸酶活性无干扰.sds-page分析发现不同突变体蛋白表达丰度有差异，酶活性同裂解液中总蛋白浓度正相关.receiver-operation-curve（roc）分析发现尿酸酶间催化效力比值越大，则所得曲线下面积（area-under-the-curve，auc）越接近1.00，此比值接近1.8时auc约0.95.以突变体与起始物的酶活性浓度差值超过起始物标准差1.4倍为阈值，能识别催化效力达起始物1.8倍以上的突变体.因此，用xoahp法测定裂解液中尿酸酶活性，以起始物活性均值加标准差1.4倍为阈值，有望高通量筛选尿酸酶突变体库.
%K 尿酸酶
%K 二甲基酚橙法
%K 突变体
%K 高通量筛选
%K 阳性突变体阈值
%K roc曲线
%U http://www.cibj.com/oa/DArticle.aspx?type=view&id=201303025