%0 Journal Article
%T 杂合抗菌肽lpcb在毕赤酵母中的表达条件优化
%A 李增婷
%A 谢力
%A 冯顺利
%A 尤芳芳
%A 何桂桦
%A 林强
%A 曹毅
%A 乔代蓉
%J 应用与环境生物学报
%P 65-69
%D 2012
%R 10.3724/SP.J.1145.2012.00065
%X 为获取能表达具有天然活性的杂合抗菌肽的重组酵母菌，确定其最佳表达条件，将构建好的重组酵母表达载体ppiczα-a-cecropinb（1~10）-magainin2（1~12）（简称ppiczα-a-cbma）和ppiczα-a-lfcin-pro-cecropinb（简称ppiczα-a-lpcb）经sacⅰ线性化处理，分别电转入巴斯德毕赤酵母pichiapastorisx-33，利用抗生素zeocin筛选阳性克隆，pcr扩增验证，甲醇诱导表达.采用抑菌圈法初步测定产物活性，优化杂合肽lpcb诱导时间、诱导剂浓度、诱导温度、培养基ph等表达条件，传代检测其质粒稳定性.结果显示，基因工程菌p.pastorisx-33/ppiczα-a-cbma和p.pastorisx-33/ppiczα-a-lpcb成功构建.表达产物前者抑菌活性微弱，后者抑菌活性良好.杂合肽lpcb的最佳表达条件为：25℃，ph中性培养，每24h添加0.5%（v/v，φ）甲醇，诱导表达72h.重组酵母菌ppiczα-a-lpcb在培养超过100代后，未发生质粒丢失.图4参20
%K 杂合抗菌肽
%K lfcin-pro-cecropinb
%K 毕赤酵母
%K 表达条件优化
%U http://www.cibj.com/oa/DArticle.aspx?type=view&id=201012040