%0 Journal Article
%T 反向pcr法克隆芳香烃龙胆酸降解途径中诱导型龙胆酸1,2-加双氧酶基因
%A 赵渝
%A 郭鲁申
%A 徐亚同
%A 陆贻通
%A 高林
%J 应用与环境生物学报
%P 87-92
%D 2007
%X 摘要龙胆酸1,2？加双氧酶(gdo)是芳香烃龙胆酸途径的一个关键酶.产碱假单胞菌p25x具有保守性与诱导性各一组gdo同工酶，突变株snz28的保守型龙胆酸1，2加双氧酶基因(gdoⅰ)被链霉素/奇霉素抗性基因打断，但在含有龙胆酸盐的基本培养基上，仍能明显观察到gdo的活性.由龙胆酸诱导生长的snz28全蛋白二维电泳结果分析，获得了一个与ralstoniasp.u2的gdo酶有极高同源性的蛋白点.根据对该蛋白点的n端和q？tof测序的结果,设计了一对简并引物，克隆了诱导型gdo酶的片段，通过对此片段的分析，设计了逆向pcr引物，利用southernblot杂交,确定了合适的限制性内切酶(salⅰ和sphⅰ)，以单一酶切的p25x基因组dna自联后的产物为模板,进行反向pcr.测序表明，获得了一段1047bp与ralstoniasp.u2.的龙胆酸1,2？加双氧酶具有极高同源性的序列.研究结果揭示了snz28中存在诱导型gdo酶.本文中也对不同来源的gdo酶进行了比较研究，其结果为进一步对生物降解基因的进化研究打下了基础.图4表2参16
%K 关键词芳香烃
%K 龙胆酸
%K 诱导酶
%K 反向pcr法
%U http://www.cibj.com/oa/DArticle.aspx?type=view&id=1670