%0 Journal Article
%T 拟南芥基因组中注释为异胡豆苷合成酶的基因克隆及异源表达
%A 马磊
%A 张翔
%A 田永强
%A 张国林
%A 罗应刚
%J 应用与环境生物学报
%P 224-230
%D 2013
%R 10.3724/SP.J.1145.2013.00224
%X 拟南芥（arabidopsisthaliana）是生物学研究中广泛使用的模式生物.到目前为止，没有证据表明拟南芥中存在复杂生物碱，但对其基因组数据的生物信息学分析表明，有很多基因与萜类吲哚生物碱（tias）生物合成途径中的相关基因有高度的同源性.为了从分子水平研究拟南芥是否具有合成该类复杂生物碱的潜力，首先对拟南芥中可能编码异胡豆苷合成酶（str）的15个基因及其编码的酶进行广泛的生物信息学分析和计算；在此基础上，选择其中5个atstr基因为目的基因，设计特异性引物；从拟南芥中提取总rna，一步法rt-pcr克隆得到上述基因；通过ta克隆将上述基因转入pgm-t载体，筛选、酶切及pcr鉴定，dna测序验证它们的核酸序列；将测序验证的atstr基因经过pcr扩增、质粒构建、转入escherichiacolibl21(de3)中进行异源表达和蛋白纯化；在整体细胞、细胞裂解液、细胞裂解液上清和纯化蛋白共4个层次进行atstr酶功能表征，未发现目标产物或新产物的生成；上述基因的具体功能还有待进一步研究.图8表3参22
%K 萜类吲哚生物碱
%K 异胡豆苷合成酶
%K 拟南芥
%K rt-pcr
%K pcr
%K 异源表达
%U http://www.cibj.com/oa/DArticle.aspx?type=view&id=201203035