%0 Journal Article
%T 拟南芥基因组中注释为(s)-去甲乌药碱合成酶的分子克隆与异源表达[英文]
%A 张翔
%A 马磊
%A 田永强
%A 张国林
%A 罗应刚
%J 应用与环境生物学报
%P 61-68
%D 2013
%R 10.3724/SP.J.1145.2013.00061
%X 至今在拟南芥中尚未发现复杂生物碱，但是其基因组测序则表明有35个以上基因可编码(s)-去甲乌药碱合成酶（ncs）.本研究首先以经过生化表征、机理清楚的来自罂粟、日本黄连、黄唐松草和花菱草的ncs为参考，与拟南芥中注释的ncs进行了广泛的生物信息学分析与比对，从中选择5个atncs为目的基因，设计特异性引物；从拟南芥中提取总rna，一步法rt-pcr克隆得到上述基因；通过ta克隆将上述基因转入pgm-t载体，筛选、酶切及pcr鉴定，dna测序验证它们的核酸序列；将测序验证的atncs基因经过pcr扩增、质粒构建、转入escherichiacolibl21(de3)中进行异源表达和蛋白纯化；在整体细胞、细胞裂解液、细胞裂解液上清和纯化蛋白共4个层次进行了atncs酶功能表征，未发现目标产物或新产物的生成；上述基因的具体功能还有待进一步研究.
%K 分子克隆
%K rt-pcr
%K 异源表达
%K (s)-去甲乌药碱合成酶
%K 苄基异喹啉
%U http://www.cibj.com/oa/DArticle.aspx?type=view&id=201208026