%0 Journal Article
%T 人可溶性晚期糖基化终产物受体的原核表达及活性鉴定
%A 赵善超
%A 姜勇
%A 刘靖华
%A 李志杰
%A 邓鹏
%A 张桂林
%A 刘志强
%A 张训
%A 侯凡凡
%A 郑少斌
%J 南方医科大学学报
%P 769-773
%D 2005
%X 目的构建人可溶性晚期糖基化终产物受体(hsrage)his融合蛋白表达载体并在原核细胞表达与纯化。方法pcr扩增hrage基因编码区的胞质外段,利用分子克隆技术将其重组于pet-14b载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转化大肠杆菌bl21(de)3,用异丙基b-d硫代半乳糖(iptg)诱导融合蛋白表达。以尿素对获得的包涵体进行处理,用金属螯合亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性。以western印迹和elisa法对融合蛋白的免疫原性及与age的结合活性进行鉴定。结果克隆的hsrage完全正确,经过表达与纯化,获得了相对分子质量约45000的融合蛋白。纯化得到的变性蛋白经复性后可被相应抗体识别。所得到的hsrage具有与age相互结合的活性,并能够抑制age诱导的内皮细胞nf-kb的表达。结论成功地构建了hsrage融合蛋白原核表达载体且获得高效表达,得到大量的复性蛋白;该蛋白具有特异的免疫原性,保持与age的结合活性,并能够有效阻断age-rage相互作用。
%K 晚期糖基化终产物
%K 原核表达
%K 受体
%K 受体
%K 可溶性
%K 融合蛋白/生物活性
%U http://www.j-smu.com/oa/darticle.aspx?type=view&id=20050703