%0 Journal Article
%T 99tcm标记反义mir208b寡核苷酸及其转染离体肥大心肌细胞的实验研究
%A 王静
%A 冯会娟
%A 欧阳伟
%A 孙云钢
%A 吴菊清
%A 陈盼
%J 南方医科大学学报
%D 2015
%X 目的探索用放射性核素99tcm标记反义mir208b寡核苷酸，并转染离体早期肥大心肌细胞的实验过程及方法。方法合成针对mir208b的反义mir寡核苷酸（amo），lna（带锁核酸）修饰amo，将双功能螯合剂nhs-mag3（n-羟基琥珀酰亚胺-巯基乙酰基三甘氨酸）与lna-amo偶联后，用99tcm标记，然后用sep-pakc18反相层析法对nhs-mag3-lna-amo及其标记物进行洗脱纯化，前者同时经genequantdna/rnacalculator测定在260nm波长处的吸光度；不同检测方法测定纯化后标记物的标记率、放化纯度、稳定性以及与靶基因杂交的活性；建立由血管紧张素ⅱ（angⅱ）诱导的离体心肌肥大细胞模型，检验早期肥大心肌细胞内mirna208b的相对表达量以及经脂质体包裹的99tcm-nhs-mag3-lna-amo在早期肥大心肌细胞内的滞留率。结果纯化后的标记物标记率>84%，放化纯度>86%，标记物分别在新鲜人血清、生理盐水中孵育12h后，放化纯度均大于80%，并具有与靶向基因杂合的能力。离体心肌肥大模型成功建立，测得早期心肌肥大细胞内mirna208b表达升高，且最终标记物转染细胞后6h滞留率大于20%。结论在双功能螯合剂nhs-mag3以及lna的介导下，成功将放射性核素99tcm标记于nhsmag3-lna-amo，最后将反义探针顺利转染早期离体肥大心肌细胞，这为后续的在体心肌肥大核素显像提供重要实验基础。
%K mirna208b
%K 99tcm
%K 反义mir寡核苷酸（amo）
%K nhs-mag3
%K 心肌肥大
%K 脂质体
%U http://www.j-smu.com/oa/darticle.aspx?type=view&id=2015091316