%0 Journal Article
%T 慢病毒介导的犬wrd细胞p53基因沉默及稳定感染细胞系的建立
%A 李芳
%A 闫琰
%A 张茜
%A 李建宁
%A 姚青
%A 高玉婧
%A 杨怡
%A 孙玉宁
%J 南方医科大学学报
%D 2014
%X 目的构建靶向犬p53基因慢病毒干扰载体，建立稳定沉默p53基因的wrd/p53-细胞系。方法设计并构建4条针对犬p53基因的特异性shrna干扰质粒。将构建的慢病毒表达载体（pgmlv-p53）和包装质粒（packagingmix）组成的包装系统共转染293t细胞，包装病毒，收集病毒原液，超滤浓缩，并测定滴度。包装好的慢病毒感染wrd细胞，westernblot和实时荧光定量pcr方法检测不同靶点rna干扰载体对p53基因的干扰效果，确定有效靶点。针对有效靶点慢病毒颗粒以最适感染复数（multiplicityofinfection,moi）感染wrd细胞，puromycin抗生素筛选稳定感染细胞系wrd/p53-。结果结果显示p53rnai慢病毒载体构建成功，成功包装四种不同靶点的p53基因rna干扰慢病毒,病毒滴度均达到1×109tu/ml。四种干扰载体慢病毒均具有较好的干扰效果，选用沉默效果最好的pgmlv-p53a1为最优靶点，成功建立p53rnai慢病毒载体稳定感染细胞系wrd/p53-。结论成功构建p53rnai慢病毒载体，并有效干扰wrd细胞中p53mrna和蛋白表达，同时成功筛选并建立p53rnai慢病毒稳定感染wrd/p53-细胞系。
%K p53
%K rna干扰
%K 慢病毒载体
%K wrd细胞
%U http://www.j-smu.com/oa/darticle.aspx?type=view&id=2014121721