%0 Journal Article
%T 瑞氏木霉内切葡聚糖酶ii在大肠杆菌中的重组表达及重组酶性质测定
%A 雒军
%A 宫晓燕
%A 魏炜
%A 杨纯
%A 方何建
%A 戴亦军
%A 袁生
%J 南京师范大学学报(自然科学版)
%P 92-98
%D 2009
%X 将不含信号肽的瑞氏木霉内切葡聚糖酶ii(cel5a)的cdna克隆到pet-28a(+)表达质粒上,与其n末端6个组氨酸标签序列融合,构建成pet-28a(+)-egl2表达质粒,在大肠杆菌bl21(de3)中诱导表达.利用低温诱导策略,成功表达出活性重组蛋白.westernblot结果显示重组cel5a相对分子分量大约为43000.进一步对重组cel5a进行ni-nta亲和层析柱纯化并对其进行酶学性质测定,结果显示以羧甲基纤维素钠为作用底物时重组酶最适作用ph为4.5,最适作用温度为60℃;重组酶热稳定性较好,在65℃及以下保温1.5h,活性仍相当稳定.mn2+对cel5a的酶活有促进作用,fe3+和cu2+有抑制作用,其它金属离子和edta对酶活没有明显影响.底物特异性研究表明,重组cel5a只能水解混合键葡聚糖和羧甲基纤维素钠,对混合键葡聚糖的水解能力是其对羧甲基纤维素钠水解能力的6.7倍,但对微晶纤维素、glassmicrofiberfilters、木聚糖、阿拉伯木聚糖和木葡聚糖没有水解作用.
%K 羧甲基纤维素钠盐
%K 内切葡聚糖酶
%K 大肠杆菌
%K β葡聚糖
%K 瑞氏木霉
%U http://njsfdxzrb.paperonce.org/oa/darticle.aspx?type=view&id=200903020