%0 Journal Article
%T eiav基因转移载体转录后调控元件的优化
%A 李亚明？
%A 韩凌霞？
%A 曲连东？
%J 西北农林科技大学学报(自然科学版)
%P 1-6
%D 2008
%X [目的]为了提高马传染性贫血病毒(eiav)基因转移载体质粒pcpptpre(+)的外源蛋白表达能力,对其转录后调控元件进行优化.[方法]将pcr扩增土拨鼠肝炎病毒(woodchuckhepatitisvirus,whv)转录后调控元件(wpre),克隆于pgm-t载体获得重组质粒pgm-wpre,利用notⅰ酶将wpre亚克隆入pcpptpre(+),筛选wpre正向连接的重组质粒pcpptwpre,采用磷酸钙法分别将pcpptwpre和pcpptpre(+)转染hek293细胞和df-1细胞,利用荧光显微镜观察egfp蛋白的表达,利用流式细胞仪检测转染细胞中egfp阳性细胞的表达率.[结果]在hek293细胞中,pcpptwpre表达外源基因的能力极显著优于pcpptpre(+);在df-1细胞中,pcpptwpre与pcpptpre(+)表达外源基因的能力均不强,但前者略优于后者.[结论]土拨鼠肝炎病毒转录后,调控元件(wpre)可以明显增强eiav载体质粒的外源蛋白表达能力,为高表达能力伪型eiav重组病毒的获得奠定了基础,同时也为其他病毒载体的构建提供了借鉴.
%K 马传染性贫血病毒
%K 土拨鼠肝炎病毒
%K 转录后调控元件
%K 基因转移载体
%K 增强绿色荧光蛋白
%U http://www.xnxbz.net/xbnlkjdxzr/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20080201&flag=1