%0 Journal Article
%T 猪细小病毒ns1蛋白的截短表达与间接elisa诊断方法的建立
%A 田莉莉？
%A 李 丽？
%J 西北农林科技大学学报(自然科学版)
%P 32-38
%D 2012
%X 【目的】建立一种快速检测猪细小病毒（porcineparvovirus，ppv）野毒抗体的方法。【方法】参照已发表的ppv基因组（ay502114.1）序列设计合成特异性引物，利用pcr扩增ppv-ns-1基因主要抗原区域，将目的片段定向克隆至表达载体pet30a(+)，转化bl21（de3）表达菌，用iptg诱导表达重组蛋白。以该蛋白作为诊断抗原，经过对间接elisa条件的优化，建立检测ppv抗体的ns1-elisa诊断方法，对该方法的特异性、敏感性、重复性进行检测。用建立的ppvns1-elisa诊断方法和血凝抑制试验（hi）同时对临床送检的306份血清样品进行检测，比较二者的符合率。【结果】成功扩增了870bp的ns1基因部分片段，构建了pet30a-ns1原核表达载体，获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。以纯化蛋白作为诊断抗原，建立了检测猪细小病毒抗体的ns1-elisa诊断方法。该方法与猪圆环病毒2型（pcv-2）、猪伪狂犬病病毒（prv）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（prrsv）、猪乙脑病毒（jev）、猪流行性腹泻病毒（pedv）、猪传染性胃肠炎病毒（tgev）、猪瘟病毒（csfv）等7种常见猪病病毒的阳性血清均不发生反应；该方法检测敏感性为1∶12800；批内重复性试验和批间重复性试验中样品的变异系数分别小于5%和10%。ppvns1-elisa检测方法与hi的符合率为96.2%。【结论】制备了ns1重组蛋白，该蛋白具有良好的免疫原性，以其作为包被抗原建立的ppvns1-elisa诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性，为ppv的快速诊断和流行病学调查等提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。
%K 猪细小病毒
%K ns1蛋白
%K 截短表达
%K 间接elisa诊断方法
%U http://www.xnxbz.net/xbnlkjdxzr/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20120706&flag=1