%0 Journal Article
%T 人生长激素慢病毒载体的构建及其在鼠骨骼肌成肌细胞中的表达
%A 刘向阳** 卢永昕* 徐玉兰 李小青 刘隽 李爱华 罗萍 万建平
%J 生物工程学报
%D 2006
%X 构建能表达人生长激素（hgh）的plentivirus6/v5_hgh载体，并实现hgh基因在骨骼肌成肌细胞中大量、长期和稳定的表达。体外培养sd鼠骨骼肌成肌细胞，并通过免疫组织化学方法鉴定所得细胞、用台酚兰染色确定培养细胞的活性并绘制生长曲线。将目的基因hgh亚克隆到真核细胞表达载体plenti6/v5-d-topo载体上，构建重组质粒plentivirus6/v5-hgh。将plenti6/v5-hgh及阳性对照质粒plenti6/v5_egfp分别用lipofectamin2000介导转染体外培养的sd乳鼠骨骼肌成肌细胞。在激光共聚焦扫描显微镜下计数，确定阳性对照质粒的转染数，从而估计该基因的转染效率。加入筛选试剂以获得稳定表达异源生长激素（gh）的成肌细胞。收集转染及筛选后的细胞培养基，用放射免疫分析法（ria）检测重组人生长激素（rhgh）的表达水平。聚合酶链式反应法(pcr)及dna测序显示hgh基因成功地插入到plenti6/v5-d-topo载体中；阳性对照质粒转染细胞24h后，在激光共聚焦显微镜下观察，其转染效率达40%以上。检测收集的上清，与对照组相比,有极显著差异(p<0.01)，观察至第8周，rhgh仍持续稳定表达。通过检测培养的chang-liver肝细胞上清中胰岛素样生长因子-1（igf-1）的水平，验证了rhgh的生物学活性。实验通过培养高纯度的成肌细胞，构建了能在真核细胞内表达hgh的重组质粒plenti6/v5-hgh，实现了hgh基因在骨骼肌成肌细胞中大量、长期和稳定的表达，并且获得的rhgh具有较强的促进肝细胞分泌igf-1的能力。
%K 生长激素
%K 慢病毒载体
%K 载体构建
%K 成肌细胞
%K 基因表达
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=06020243&flag=1