%0 Journal Article
%T sars冠状病毒核衣壳蛋白在酵母中的表达与活性检测
%A 刘如石？？ 邱义兰 杨坤宇 张智洪 梁良 张军 夏宁邵*
%J 生物工程学报
%D 2005
%X 用pcr扩增sars冠状病毒n蛋白全长cdna，克隆到酵母表达载体ppic3.5k，构建ppic3.5k-scovn酵母表达质粒。表达质粒线性化后电转化到毕赤酵母gs115中，经g418-rdb,mm/md平板与pcr扩增筛选获得his+mut+重组菌株。比较研究了不同的培养基、溶解氧以及甲醇浓度对菌株生长与重组蛋白表达的影响。结果表明：fbs培养基最适宜重组菌的生长与表达，溶氧对菌体的生长与表达有显著的影响，甲醇诱导最佳终浓度为1％（v/v），sds-page分析重组蛋白的表达量，发现重组n蛋白表达量占细胞总蛋白的6％，每升培养基可以生产410mg重组n蛋白，生物量达45od600。western　blotting结果表明，重组n蛋白对鼠源单克隆抗体以及sars病人恢复期血清具有较强的特异性反应。对摇瓶培养条件进行了发酵罐放大实验，结果生物量达到348od600，表达量达到2.5g/l，分别为摇瓶表达的7.7倍和6.1倍，为sars早期血清学诊断研究以及为n蛋白在病毒复制以及致病机理的研究奠定了一定的基础。
%K 严重急性呼吸综合症
%K 核衣壳蛋白
%K 毕赤酵母
%K 真核表达
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=05040540&flag=1