%0 Journal Article
%T 人视黄醇结合蛋白4在杆状病毒系统中的表达及其多克隆抗体制备
%A 任玉莹？
%A 陈丹？
%A 郭玉争？
%A 史洪娜？
%A 刘娟？
%A 班靖洋？
%A 刘亚宁？
%A 吴晓芳？
%A 王维龙？
%A 程海？
%A 李鼎锋？
%A 刘勇？
%A 王立良？
%J 生物工程学报
%P 974-985
%D 2013
%X 旨在利用杆状病毒系统表达、制备人视黄醇结合蛋白(rbp4)并检测其免疫原性。将人rbp4基因片段及信号肽ss64片段亚克隆到杆状病毒转移载体pfastbac-dual(pfbd)中，获得相应的重组转移质粒；转化大肠杆菌菌株dh10bac，转座后经筛选获得重组穿梭质粒rbacmid，将重组穿梭质粒转染孔板培养的sf9细胞，获得含人rbp4表达框的重组杆状病毒，经过扩增获得毒种。毒种感染对数生长期的sf9细胞并表达人rbp4蛋白(i-rbp4)，通过sds-page和westernblotting对表达蛋白进行检测和鉴定。用毒种感染悬浮培养的sf9细胞制备一批rbp4蛋白，完成sds、westernblotting的检测及少量的多抗制备。纯化重组蛋白并与e.coli重组人rbp4(e-rbp4)分别免疫家兔。实验结果，酶切鉴定及测序证实重组转移质粒构建正确；成功构建重组rbp4-bacmid；人rbp4蛋白在昆虫细胞获得高效表达。表达的rbp4蛋白可以分泌到培养基中，分子量约为23kda，经过计算表达量为100mg/l；纯化蛋白免疫兔子制备了多抗血清，血清滴度为1∶100000，高于原核表达的抗体滴度(1∶10000)，与人体提纯蛋白制备的抗体滴度相近。杆状病毒系统高效表达了人的rbp4蛋白，具有较好的抗原性，并获得高亲和力的抗血清，为下一步的人血rbp4检测试剂盒的制备打下了坚实的基础
%K 视黄醇结合蛋4
%K (rbp4)
%K 杆状病毒表达系统
%K 基因表达
%K 蛋白纯化
%K 多抗制备
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc13000974&flag=1