%0 Journal Article
%T 菊粉酶基因的异源表达、分离纯化及酶学性质
%A 李益民？
%A 高教琪？
%A 袁文杰？
%A 相瑞娟？
%A 侯胜博？
%J 生物工程学报
%P 670-681
%D 2015
%R 10.13345/j.cjb.140468
%X 为进一步提高菊粉酶在生物技术领域的应用，研究了来源于马克斯克鲁维酵母kluyveromycesmarxianusyx01的菊粉酶性质。通过在毕赤酵母gs115宿主细胞中异源表达该菊粉酶基因(inu)，获得了一种外切型菊粉酶，经聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)验证其分子量为86.0kda。进一步在该菊粉酶上增加6个his标签，采用聚乙二醇(peg)20000透析浓缩和ni-ntaagarose静态亲和吸附作用的方法，完成菊粉酶的分离纯化，纯化倍数和酶回收率分别为3.6和33.1%。比较发现粗酶液与纯酶的酶学性质相似，且菊粉酶的最适反应温度为60℃，最适ph值为4.62，并测得该酶的km和vmax值，以菊粉为底物时，km和vmax值分别为80.53g/l和4.49g/(l·min)；以蔗糖底物时，km和vmax值分别为183.10g/l和20.20g/(l·min)。金属离子mn2+、ca2+、cu2+、zn2+和fe2+对酶活力具有不同程度的抑制作用，其中cu2+、zn2+和fe2+的抑制作用最为显著。这些研究为进一步提高菊粉酶在工业化的应用奠定了基础。
%K 马克斯克鲁维
%K 菊粉酶
%K 重组表达
%K 分离纯化
%K 酶学性质
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc15050670&flag=1