%0 Journal Article
%T 易错pcr提高华根霉脂肪酶的热稳定性
%A 王睿？
%A 喻晓蔚？
%A 徐岩？
%J 生物工程学报
%P 1753-1764
%D 2013
%X 为了提高华根霉rhizopuschinensiscctccm201021脂肪酶的热稳定性，运用定向进化-易错pcr的方法，经两轮易错pcr引入突变，利用fast-bluerr顶层琼脂法对突变文库进行筛选，第一轮易错pcr后筛选到2株突变菌株，第二轮筛选到4株突变株。第二轮最佳突变株ep2-4，其中3个氨基酸发生了突变：a129s、p168l和v329a。该突变酶ep2-4在60℃下半衰期相对原始酶r27rcl提高5.4倍，t50值提高7.8℃。酶学性质研究表明，突变酶ep2-4在热稳定性提高的基础上，仍保有良好的催化活性。蛋白质三维结构模拟显示，突变a129s可以和gln133形成氢键，增加了酶表面的亲水性和极性；p168l可以与邻近的leu164形成疏水键，导致突变酶的热稳定性提高。
%K 定向进化
%K 易错pcr
%K 华根霉脂肪酶
%K 热稳定性
%K 毕赤酵母
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc13121753&flag=1