%0 Journal Article
%T 苏云金芽孢杆菌vip3a基因的检测及保守性分析
%A 陈建武 唐丽霞 宋少云 袁美妗 庞义*
%J 生物工程学报
%D 2003
%X vip3a蛋白是苏云金芽孢杆菌（bacillusthuringiensis，bt）在营养期分泌的一类新型杀虫蛋白。用pcr方法从114个bt菌株和41个bt标准菌株中筛选到39株即约25%的菌株含有vip3a基因。利用所制备的vip3a蛋白的多克隆抗体对以上含有vip3a基因的bt菌株进行western印迹分析，发现多数pcr反应为阳性的菌株都产生89kd大小的蛋白，其中有4株没有vip3a蛋白的表达。从以上菌株中挑选2个对夜蛾科害虫具有较高和较低毒力的菌株，即s101和611，并分别进行vip3a基因的克隆和测序，再与genbank上所登录的其它6个全长vip3a基因和2个已报道的但未登录genbank的vip3a基因进行核苷酸和氨基酸序列比较，结果表明，vip3a是一个极其保守的基因。将以上所克隆的2个vip3a基因即vip3as101和vip3a611分别插入表达载体pqe30构建了表达质粒potp-s101和potp-611，转化到大肠杆菌m15，经1mmol/liptg诱导后均表达89kd大小的vip3a蛋白。蛋白可溶性试验表明，vip3a-s101和vip3a-611分别有48%和35%的蛋白是可溶的。将vip3a-s101和vip3a-611蛋白和已报道的vip3a-s184蛋白对初孵斜纹夜蛾(spodopteralitura)幼虫进行生物测定，结果表明，3个vip3a蛋白对斜纹夜蛾幼虫毒力没有显著性差异，这说明了vip3a个别氨基酸的变化对蛋白的杀虫活性没有影响。
%K 苏云金杆菌
%K vip3a基因
%K 克隆
%K 表达
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=03050538&flag=1