%0 Journal Article
%T dnabsplitintein高表达载体及其介导的环肽库构建
%A 蔺增曦？
%A 王胜兰？
%A 杨秀山？
%A 杨克迁？
%J 生物工程学报
%P 1924-1930
%D 2008
%X 以pet28a为起始质粒,构建高表达dnabsplitintein的重组质粒。将质粒pvmut上的编码intc-dnab-n-intn片段克隆至pet28a,得到表达载体pev,在t7启动子的作用下可使融合dnabsplitintein大量表达;并在splitintein介导下发生催化dnab-n的剪接反应,生成环化的dnab-n蛋白。将合成的包含随机编码5肽的大小为115bp的片段插入质粒pevdnab-n位置,转化大肠杆菌后得到一个编码含有6肽(含5个随机氨基酸和1个cys)的包含约103个克隆的表达载体pev-is库。随机挑取20个克隆,测序证明均按正确阅读框插入了不同的小肽序列;挑取其中9个克隆进行表达,结果表明可产生大量的融合蛋白,90%的融合蛋白在16oc表达20h后发生体内剪接。将在30oc表达3h的融合蛋白用his柱进行纯化,通过maldi-tof质谱检测到了目的环肽分子量。
%K split
%K ssp
%K dnab
%K mini-intein
%K 环肽库
%K 自我剪接
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc08111924&flag=1