%0 Journal Article
%T 人血管内皮生长因子受体kdr胞外3区的表达与配体结合活性的鉴定
%A 张娟？
%A 张艳丽？
%A 李海鑫？
%A 陈卫？
%A 张弢？
%A 王旻？
%J 生物工程学报
%P 1962-1967
%D 2008
%X 血管内皮生长因子受体(vegfr)是血管内皮生长因子的特异性受体,vegfr-2在介导vegf刺激内皮细胞增殖及血管通透性等生物学活性中起重要作用。为在大肠杆菌中实现可溶性的人血管内皮生长因子受体kdr胞外3区的表达,并鉴定其与配体结合的活性。采用重叠pcr的方法合成人血管内皮生长因子kdr胞外3区基因,将该基因与高效表达载体pet-32a重组,转化大肠杆菌rosetta(de3)中,表达产物依次经过cm阳离子交换树脂和镍柱亲和层析纯化。利用elisa法和体外抑制vegf刺激的人脐静脉内皮细胞增殖实验检测表达产物与配体结合的活性。sds-page显示,目的蛋白主要以可溶性trx-kdr3融合蛋白表达于胞质,30oc时1mmol/liptg诱导细菌5h融合蛋白表达量约占胞质可溶性总蛋白的20%,经cm阳离子交换树脂和镍柱亲合层析纯化得到纯度为95%的产物,westernblotting鉴定是目的蛋白。elisa和体外huvec细胞增殖实验显示,表达产物具有特异性结合hvegf165的活性,且该作用呈一定的浓度依赖性。具有配体特异性结合活性的可溶性人血管内皮生长因子受体kdr胞外3区成功表达,为靶向血管抗肿瘤治疗和相关抗体的研究奠定了基础。
%K 血管内皮生长因子
%K kdr
%K 蛋白表达与纯化
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc08111962&flag=1