%0 Journal Article
%T 灵杆菌非特异性核酸酶的原核表达、纯化及活性分析
%A 陈鹏？
%A 杨海艳？
%A 李慧婧？
%A 杨龙雨？
%A 李学俊？
%J 生物工程学报
%P 1247-1257
%D 2011
%X 以灵杆菌基因组dna为模板，pcr扩增非特异性核酸酶(non-specificnuclease，nu)基因，并克隆到pmal-c4x载体上构建重组表达载体pmal-c4x-nu。经测序及blastn发现其与灵杆菌serratiamarcescens核酸酶基因的同源性为97％。将构建的表达载体pmal-c4x-nu转入大肠杆菌bl21，经iptg诱导实现了胞内表达78kda的麦芽糖结合蛋白-nu融合蛋白(maltose-bindingprotein-nu，mbp-nu)，其最佳诱导表达条件为37℃，0.75mmol/liptg诱导1.5h。用amyloseresin纯化得到了目的蛋白。活性检测表明mbp-nu具有同时降解dna和rna的活性，在37℃、ph8.0时活性最高，比活力为1.11×106u/mg，目标蛋白的纯化效率可达10.875mg/l。纯化的目标蛋白中无蛋白酶活性存在。0.5mmol/l乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid，edta)、1mmol/l苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonylfluoride，pmsf)以及150mmol/lkcl对mbp-nu的活性几乎无影响，因此mbp-nu可作为蛋白质纯化过程中核酸的高效降解酶。
%K 灵杆菌核酸酶
%K 载体构建
%K 融合蛋白
%K 亲和纯化
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc11001247&flag=1