%0 Journal Article
%T o-glcnacase抗原片段的选择、优化表达和多克隆抗体的制备
%A 林霖？
%A 李国超？
%A 李中华？
%A 徐䶮？
%A 田高飞？
%A 李静？
%A 刘艳玲？
%J 生物工程学报
%P 1183-1190
%D 2011
%X 为了探讨o-glcnac修饰的生物学作用和相关疾病的发病机理，需制备高效、专一的o-glcnacase(oga)抗体。通过对人源oga蛋白进行序列分析发现，氨基端1~350aa片段(soga)抗原性和亲水性较强，将该片段构建至原核表达载体pet-28a，并在大肠杆菌escherichiacolibl21(de3)中进行诱导表达，通过优化iptg浓度(0.05mmol/l)和诱导时间(10h)获得了高可溶性表达的重组蛋白酶。采用ni-nta亲和层析和分子筛层析对重组蛋白进行了纯化，sds-page检测分子量的大小(45kda)和纯度(95％以上)。以4-mu-o-glcnac为荧光底物，检测到soga的糖苷酶活性为106nmol/(min·mg)，表明该片段是oga糖苷酶的活性区域。以此片段作为抗原免疫新西兰大白兔，以cnbr活化sepharose4b微珠纯化抗血清制备oga特异性多克隆抗体。westernblotting和elisa检测表明，该抗体可以特异识别含有oga糖苷酶活性区域的多种变体，检测灵敏度为0.11ng/ml(效价为1∶80000)，可应用于o-glcnacase生物功能研究。
%K o-glcnacase
%K 表达
%K 生物活性
%K 多克隆抗体
%K 亲和纯化
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc11001183&flag=1