%0 Journal Article
%T 荧光假单胞菌短链脱氢酶的克隆、表达及酶学性质分析
%A 薛群？
%A 应向贤？
%A 杨池？
%A 汪钊？
%J 生物工程学报
%P 1317-1325
%D 2011
%X 为了研究荧光假单胞菌中短链脱氢酶的生理角色和催化特性，从荧光假单胞菌pseudomonasfluorescensgim1.49基因组dna克隆表达了一个短链脱氢酶的编码基因pfd，并分析了该基因产物的酶学性质。基因pfd全长684bp，编码227个氨基酸，推算分子量为24.2kda。将携带短链脱氢酶基因的重组质粒pet28b-pfd转入大肠杆菌bl21(de3)进行表达，得到了28kda的表达产物。重组荧光假单胞菌短链脱氢酶(pfd)能氧化4-氯-3-羟基丁酸乙酯、1-苯乙醇、苯甲醇、仲丁醇和还原4-氯-乙酰乙酸乙酯、2-溴-苯乙酮、4-溴-苯乙酮等底物。以4-氯-3-羟基丁酸乙酯为底物时活力最高，km值为186.90mmol/l，vmax为89.56u/mg。氧化4-氯-3-羟基丁酸乙酯时，最适反应温度和ph分别为12℃和10.5，倾向于利用nad+作辅酶；而还原4-氯-乙酰乙酸乙酯时，最适温度和ph为24℃和8.8，倾向于利用nadph作辅酶。重组pfd能耐受50％(v/v)的甲醇等有机助溶剂，ca2+(1mmol/l)和edta(5mmol/l)对其酶活有一定的促进作用。上述结果表明，重组pfd是一个新型的短链脱氢酶，其代谢角色推测与卤代次级醇的氧化降解有关。
%K 短链脱氢酶
%K 荧光假单胞菌
%K 克隆与表达
%K 酶学性质
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc11001317&flag=1