%0 Journal Article
%T 蛋白酪氨酸磷酸酶shp-1/shp-2催化活性域的表达和动力学分析
%A 莫毅？
%A 王伟？
%A 梁方方？
%A 傅冠元？
%A 蒋和生？
%A Wayne Zhou？
%J 生物工程学报
%P 274-278
%D 2009
%X 为了分离纯化shp-1/shp-2催化活性域蛋白(分别命名为d1c/d2c),并估测其动力学常数,将已经构建好的d1c/d2c重组质粒转化escherichiacolibl21菌株,经iptg诱导表达、菌体裂解缓冲液悬浮和超声波破碎后,通过hplc分离纯化d1c/d2c蛋白,所得产物进行sds-page电泳检测。然后,以py作为去磷酸化反应的底物,利用孔雀绿显色法,通过双倒数作图法对纯化的d1c/d2c蛋白进行动力学分析。结果表明,本试验已成功地表达了d1c和d2c蛋白,主要以可溶性蛋白的形式表达;利用hplc技术可有效地对d1c/d2c蛋白进行分离纯化;d1c的相对分子质量为34.6kd,米氏常数km=2.04mmol/l,催化常数kcat=44.98s,特异性常数kcat/km=22.05l/(mmol·s);d2c的相对分子质量为35.3kd,米氏常数km=2.47mmol/l,催化常数kcat=27.45s,特异性常数kcat/km=11.11l/(mmol·s);d1c的磷酸酶活性较强于d2c。
%K shp-1
%K shp-2
%K 蛋白表达
%K 蛋白纯化
%K 动力学分析
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc09000274&flag=1