%0 Journal Article
%T 基于t7表达系统的洋葱伯克霍尔德菌g63脂肪酶同源高效表达
%A 贾彬？
%A 杨江科？
%A 闫云君？
%J 生物工程学报
%P 215-222
%D 2009
%X 为实现对洋葱伯克霍尔脂肪酶的可控高效表达,将目前被广泛使用的t7重组蛋白高效表达系统移植到洋葱伯克霍尔德菌(burkholderiacepacia)g63中进行脂肪酶同源表达。首先采用pcr从大肠杆菌bl21(de3)中得到t7rna聚合酶基因(t7rnap)并将其克隆到致死质粒pjq200sk上,然后在t7rnap前后各加入500bp用于同源重组的片段,再通过三亲本杂交把t7rnap整合到b.cepacia基因组上,使t7rnap受到脂肪酶基因(lipa)启动子调控。接着把lipa和它的伴侣基因lipb单独或全部克隆到载体pucpcm和pbbr22b上,构建出pbbr22blipab、pbbr22blipa、pucpcmlipab、pucpcmlipa、pucpcmδlipalipb、pucpcmδlipa、pucpcmδlipb七种表达质粒,通过电转化将上述表达质粒转化到含t7rnap的b.cepacia宿主菌中,最终得到一系列脂肪酶基因工程菌。通过摇瓶诱导发酵发现含表达质粒pucpcmlipab的工程菌脂肪酶酶活最高,达到607u/mg,与野生菌相比酶活力提高2.8倍,并且除含pucpcmδlipb的工程菌外,其它工程菌的脂肪酶酶活均有不同程度提高。野生菌与工程菌pucpcmlipab的发酵液经硫酸铵沉淀,sephadexg-75凝胶过滤纯化后,比酶活分别为29984u/mg和30875u/mg。以上结果表明,构建的基于t7表达系统的b.cepacia脂肪酶基因工程能有效提高脂肪酶的表达量,同时说明分泌信号pelb和增强转录的核糖体接合位点对脂肪酶的表达有促进作用。
%K t7
%K rna聚合酶表达系统
%K 同源表达
%K 三亲本杂交
%K 洋葱伯克霍尔德菌g63
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc09000215&flag=1